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规模猪场主要疫病抗体水平监测及免疫效果分析

海辉养猪网 猪群保健 2021年06月13日
随着畜禽养殖业规模化、集约化和商品化程度的增高,畜禽流动和引种工作的频繁,一些疾病的发生、发展变得越来越复杂。一些疫病屡控不止,时有起伏;部分传统疫病非典型化且临床症状日渐复杂;新的病毒感染性疫病日渐增多;一些传染病的免疫失败经常发生,引起兽医工作者极大的关注。猪瘟是严重危害养猪业最古老的疾病之一,近年来,非典型化猪瘟逐渐增多。猪伪狂犬病(PR)自1902年首先在匈牙利发现以来,世界上已有50多个国家存在,我国有20多个省、市流行本病,近来呈不断蔓延之势。猪蓝耳病又称猪繁殖和呼吸综合征(PRRS),可感染各种年龄阶段猪。自1987年在美国首次发现以来,随后加拿大、德国、荷兰、英国、法国、日本等陆续报道本病流行。我国除台湾外,1996年才报道,但短短几年时间,很多省份都报道本病不同程度存在。近来,很多大型猪场均发生以母猪流产、产死胎、弱仔、木乃伊胎等病例,大多由该病原引起。为了摸清规模猪场中猪瘟抗体水平和免疫状况,猪伪狂犬病、猪蓝耳病阳性率和分布情况,有重点地开展相应的免疫预防,我们检测了杭州市24个规模猪场911份血清中的猪瘟、猪伪狂犬及猪蓝耳病抗体,现报道如下。 
    1 材料和方法 
    随机取样,采自杭州地区24个规模养猪场(未经猪伪狂犬病及猪蓝耳病疫苗免疫),其中母猪血清621份,肥育猪207份,种猪(此处专指种公猪,以下同)83份,血清分离后置冰箱2l℃保存备用。
    猪瘟正向间接血凝抗原、阴性和阳性血清,购自中国农科院兰州兽医研究所,试剂批号为:2001019。
    猪伪狂犬病、猪蓝耳病ELISA诊断试剂盒购自美国IDEXX公司,试剂批号为06685-330FT和09265-089HT。
    96孔血凝板,购自浙江华东医药公司。
    猪瘟血清抗体水平的检测,采用正向血凝试验。具体操作步骤如下:即在%孔血凝板上,每孔加入50ul稀释液,每排第1孔加入待检血清50ul,递比稀释待检血清至血清浓度为1:512,最后50ul丢弃。再在每孔加入抗原诊断液25ul,置湿盒中于25℃孵育1.5-3h,判定结果。
    判定标准:凡能使50%的红细胞凝集的血清最大稀释倍数为该份血清的抗体效价,猪瘟血清抗体效价高于或等于1:16视为免疫合格。
    猪伪狂犬病、猪蓝耳病抗体检测参照美国IDEXX公司ELISA诊断试剂盒说明书进行。待检血清分别作1:20(猪伪狂犬病抗体检测)和1:40(猪蓝耳病抗体检测)稀释。取稀释好的待检血清100ul加入包被好的96孔聚苯乙烯诊断试剂盒中,置湿盒内25℃作用30min,取出,用洗涤液充分洗涤3-5次,甩尽残留液体,每孔加入酶标抗体100ul,湿盒内2.5℃作用30min,洗涤。再在每孔中加入TMB底物溶液100ul,湿盒内25℃;作用15min后,加入终止液100ul,立即置BIO-RAD550型酶标仪上650nm处测定。分别按所附计算公式判定是否为血清抗体阳性。  
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